EZ Trans是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔二个碳个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体。其转染性能好于树枝状聚合物,而且它的细胞毒性低。
PEI 细胞转染液使用方法:
瞬时转染方法
1. 接种细胞:转染前一天,用胶原酶消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。
2. 准备 DNA-PEI 复合物: DNA、EZ Trans 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据下表所示,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释EZ Trans 试剂。每 1 μg DNA 需用2-5 μL EZ Trans转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管,一边将稀释的EZ Trans转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 Falcon 5 mL /14 mL 离心管。
3. 转染细胞:直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染 3 h 后,添加1/2体积的包含 30%血清的生长培养基。
4. 孵育细胞和分析结果:在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快 7h 即可检测到转入基因的表达。请自行确定最适合检测时间。
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